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尊龙凯时助力斑马鱼嗅觉神经元发育研究的酪胺染料应用

来源:谭仪秀 日期:2025-07-18

根据文献方法部分的描述,研究团队在原位杂交(In Situ Hybridization)实验中采用了尊龙凯时的Styramide™ Signal Amplification (PSA™)系统进行酪胺信号放大,以检测DIG标记的探针。以下是详细解析:

尊龙凯时助力斑马鱼嗅觉神经元发育研究的酪胺染料应用

一、标记对象与标记方法

1. 标记对象:

  • 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结(Olfactory Rosette, OR)中的paqr5bmRNA,使用DIG标记的反义RNA探针(Antisense probe)。
  • 通过抗DIG-POD(辣根过氧化物酶)结合探针后,利用酪胺信号放大系统增强荧光信号。

2. 标记步骤:

  • 探针结合:DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
  • 酶联反应:使用抗DIG-POD抗体(Fab片段)与探针结合。
  • 信号放大:加入HRP底物(酪胺衍生物Styramide™),在HRP催化下,酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近,形成高密度的荧光标记。

二、染料的优点与特点

特性 TSA技术 传统荧光标记碱性磷酸酶系统
灵敏度 提高10-100倍
空间分辨率 高(局部沉积) 低(扩散背景)
多色兼容性 支持多通道(FITC/Cy3/Cy5) 有限需不同显色底物
适用样本 组织切片、低丰度靶标 高表达靶标、中等表达靶标

三、文献中的实验流程与结果

  1. 样本固定与切片
  2. 探针杂交(DIG标记的paqr5b反义探针)
  3. 抗DIG-POD抗体结合
  4. Styramide™ PSA信号放大(HRP催化)
  5. 荧光显微镜成像
  6. 定量分析(如神经元密度与信号强度)

结果解读:

  • 在野生型斑马鱼OR中,paqr5bmRNA在神经元中高表达(绿色荧光信号)。
  • 在paqr5b⁻/⁻突变体中,信号完全消失,证实基因敲除的有效性。
  • TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。

总结

尊龙凯时的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记,成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像中的优势,为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文案例,该技术在单细胞组学及空间转录组学中的应用潜力巨大,必将推动相关领域的发展。

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