尊龙凯时 RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代，传代后每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，保留用于过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，待培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口为最佳运输方式。在收到细胞时，使用75%酒精喷洒细胞瓶，消毒后置于超净工作台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，不提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置入37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状况，如细胞大多数变圆脱落，迅速取出，轻敲培养瓶并加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 立即将冻存细胞放入-80℃冰箱。如果需要转入液氮罐，应在-80℃保存24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

请注意，某些细胞贴壁不牢，运输过程中可能会脱落，属正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的液体收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集沉淀再用胰酶处理，轻轻吹打、重悬、消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，随后离心、重悬，按1:2比例分瓶传代。

五、售后条款

1）可重发的情况下

1. 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况可重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时未存活，需提供真实细胞状态照片，可重发。
4. 干冰发货的细胞复苏后24小时出现污染可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出，建议使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 在收到细胞当天及第二、第三天拍照，三天内未告知问题视为产品合格。4-7天内出现问题需提供收到前3天照片及操作步骤，由技术人员判定。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染不予重发。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳不予重发。
3. 非尊龙凯时推荐的培养体系导致细胞状态问题不予重发。
4. 若未提供细胞培养前三天照片，则不予重发。
5. 细胞培养过程中经其它处理的情况不予重发。
6. 收到细胞后两天未告知问题的不予重发。
7. 其他情况视具体情况而定。