### 猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒使用说明书

产品名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：50T/盒

预期用途：本试剂盒运用实时荧光PCR原理，能够定性检测猪蓝耳病病毒，为猪蓝耳病病毒的诊断及疗效评估提供重要指导。

原理：本试剂盒专为猪蓝耳病病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针。在反应体系中存在猪蓝耳病病毒基因组模板时，PCR反应产生并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测和输出信号，实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成：

• 1. PRRSV RT-PCR反应液 - 875 μL x 1管
• 2. PRRSV混合酶液 - 125 μL x 1管
• 3. PRRSV阳性对照 - 40 μL x 1管
• 4. PRRSV阴性对照 - 40 μL x 1管
• 5. 说明书 - 1份

储存条件及有效期：本试剂盒应避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器：兼容于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求：

• 血液或血清样品：使用无菌注射器抽取样品并置于离心管中待检。
• 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样20g，加少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨并稀释，然后离心取上清待检。
• 注意避免样本间交叉污染。
• 样本可即刻检测，若无法立刻检测，应在2～8℃下冷藏，长期保存需置于-80℃以下。

检验方法：

1. 试剂准备：取出试剂盒内所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除附着液体；根据实验需要计算反应所需各类试剂量。
2. 样本准备：使用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒提取RNA，按照说明书操作。
3. 加样：在PCR反应样本管中加入处理好的待测标本RNA并低速离心，阴性对照和阳性对照分别加入各5μL。
4. PCR扩增：将样本管放置于实时荧光定量PCR仪，并按照设定参数进行PCR扩增。

检测结果的解释：

• FAM+：标本检测出猪蓝耳病病毒。
• -：标本中未检出猪蓝耳病病毒。

注意事项：

• 实验室须符合基因扩增检验实验室管理规范；
• 样本处理需在0-4℃条件下进行并避免RNA降解；
• 避免交叉污染，使用后应立即清洁工作台；
• 反应液吸取时避免气泡；
• 试剂盒内所有试剂使用前需常温下充分融化混匀；
• 为防止荧光干扰，避免直接接触PCR管；
• 废弃物应及时处理并定期消毒实验用品。

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